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解一下RPMI-1640培養基的配置方法吧

更新時間:2022-12-06  |  點擊率:1019
  RPMI全稱為RoswellParkMemorialInstitute,指的是洛斯維·帕克紀念研究所。RPMI是這個研究所研發的一類細胞培養基,1640是培養基代號。
 
  RPMI-1640培養基是Moore等人于1967年在RoswellParkMemorialInstitute研制,最初針對淋巴細胞培養設計,含BSS+21種氨基酸+維生素11種等。現在已經廣泛應用于各種正常細胞和癌細胞的培養,尤其是懸浮細胞的培養,是使用最為廣泛的培養基之一。
 
  (也可以參考使用用來養其他細胞,比如我養的巨噬細胞就是典型的貼壁細胞,可以用1640來養。曾經試過用DMEM養這個巨噬,結果全部不貼壁,浪費了珍貴的細胞)
 
  RPMI-1640培養基最初是為淋巴細胞培養專門設計的,其含有多類細胞培養所需的氨基酸、維生素、無機鹽等多種成分,但不含蛋白質、脂類或者任何生長因子,需搭配血清和無血清添加物使用。
 
  下面讓我們一起來了解一下RPMI-1640培養基的配置方法吧
 
  一、干粉培養基的過濾配制
 
  1、將1升量的干粉在950ml細胞培養級純凈水中溶解
 
  2、加入2克碳酸氫鈉,繼續攪拌至溶解
 
  3、用1N鹽酸或1N氫氧化鈉調整到要求的pH,并將溶液體積調至1000ml
 
  4、在超凈臺內用0.22um濾膜負壓過濾
 
  5、將培養基在2~8℃避光保存
 
  二、高壓滅菌型的配制
 
  1、將1升的高壓滅菌型干粉在900ml細胞培養級純凈水中溶解
 
  2、將溶液pH調至4.0并將溶液體積調至960ml
 
  3、在121℃,15psi高壓消毒5分鐘
 
  4、將培養基迅速取出,避免過久加熱引起成份分解或液體蒸發減少
 
  5、待培養基冷卻至室溫后,無菌操作加入29.3ml的無菌7.5%碳酸氫鈉溶液,及10ml的無菌200mML-谷氨酰胺
 
  6、如有必要,用無菌的1N鹽酸或1N氫氧化鈉調整pH
 
  7、將培養基在2~8℃避光保存